GEメーカーSP HPの使用説明書/サービス説明書
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Instructions 71-7149-00 AN HiTrap ion exchange columns GE Healthcare HiTrap SP HP , 1 ml and 5 ml HiTrap Q HP , 1 ml and 5 ml HiT rap ™ SP HP an d Hi T rap Q HP a re pre pac ked , rea dy to us e cat.
p. 2 Code No. Designation No. su pplied 17 - 1151 - 01 Hi T rap S P HP 5 x 1 ml 17 - 1152-01 HiTrap SP HP 5 x 5 m l 17 - 1153- 01 Hi T rap Q H P 5 x 1 ml 17 - 1154 -01 Hi T rap Q H P 5 x 5 ml Connectorkit Connectors supplied Usage No.
p. 3 1. Description Media properties SP Seph arose ™ H igh P er for ma nce an d Q Sep ha rose H igh P er fo rma nce are s tr ong ca ti on an d st ron g ani on ex cha nge rs re sp ec tiv ely . Bot h rem ain cha rge d and m ain tai n high c apa cit y over b roa d pH ra nge s.
p. 4 Ta b l e 1 . Hi T r ap SP HP a nd Hi T rap Q HP c olu mns c hara ct eri st ic s Co lum n vol ume s 1 ml o r 5 ml Co lum n dim ens io ns 0.7 × 2.5 c m (1 ml ) and 1 .6 × 2.5 c m (5 m l) T ota l ion ic ca pac ity 0.14– 0.20 m mo l (C l – )/m l me di um (Q) 0.
p. 5 2. Selection of ion exchanger and conditions Io n exch ang e chr oma tog rap hy is b ase d on a dso rpt io n and re ver sib le bi ndi ng of ch arg ed sa mpl e mo lec ule s to op pos ite ly ch arg ed gro ups at ta che d to an in so lub le ma tr ix .
p. 6 Strategy 1. Binding and elution of all sample components Bi ndi ng is a chi eved b y cho os ing a s tar t b uf fe r wit h a lo w pH for H iTrap SP HP or a h igh p H for Hi Trap Q HP . T he io nic s tre ngh t sho uld b e kep t as lo w as po ssi bl e to all ow al l com po nent s to b in d to th e ion ic ex chan ge (< 5 mS/cm ) .
p. 7 Th e buf fe ri ng io n sho uld c arr y th e sam e cha rge a s the i on ex cha nge g rou p an d sho uld h ave a pK a wit hin 0 .5 pH u nit s of t he pH u se d in th e sep ara ti on. Bu f feri ng io ns of o pp osi te cha rge m ay ta ke pa r t in th e ion e xch ang e pro ces s and caus e local distu rbance s in pH.
p. 8 Ta b l e 3 . Buf fers for anion exchange chromatography. pH in ter va l Sub st anc e Co nc . (mM ) Co unte r-io n pK a (25 ° C ) 1 4.3–5.3 N-Methylpiperazine 20 Cl - 4. 75 4.8–5.8 Piperazine 20 Cl - or HC OO - 5.33 5. 5– 6.5 L-His ti din e 20 Cl - 6.
p. 9 Fig 3. Recommended buffer substances for anion exchange chromatography. Th e colu mn s can be o pe rate d wi th a sy rin ge, p eri st alt ic pu mp o r a chromatography system. 3. Operation Buff er preparation Wate r and c hem ica ls us ed fo r buf fe r pre par at ion s hou ld be o f hig h pur ity .
p. 10 Ta b l e 4 . Prep ack ed col umn s for d esa lt ing a nd bu f fer e xcha ng e. Code No Column Loading volume Elution volume Comments Application 17 - 1408 -01 Hi T rap 0.1– 1. 5 ml 1. 3– 4.0 m l Pr epa cke d wit h For de sa lti ng an d bu f fer De sal ti ng Se pha de x™ G-25 exch ang e of p rote in Super f ine.
p. 11 Purifi cation 1. Fi ll th e syr ing e or p ump tu bin g wi th s tar t b uf fer ( lo w io nic s tre ngt h ). Rem ove t he s top per a nd co nne ct t he co lum n to th e syr ing e ( wit h th e pro vid ed a dapt or) , “dro p to dro p” to av oid i ntr odu ct ing a ir in to th e colum n.
p. 12 Note: If a P1-pu mp is u sed a m ax f lo w rat e of 1 –3 ml/m in ca n be r un on a Hi T r ap 1 ml co lu mn pa cked w it h Sep har ose H igh P er for ma nce media.
p. 13 Further optimization Th e reco mme nd ati ons g ive n abo ve wi ll gi ve a sou nd b asi s for de vel opi ng a n ef f ici ent p uri f ica tio n st ep.
p. 14 Elution with stepwise ionic strength gradients Step wi se el uti on i s the s equ ent ia l use o f the s ame b uf fe r at di f fere nt io nic st ren gt hs. I t is te chn ical ly si mpl e and f as t, an d is su ita ble f or syr in ge op era tio n.
p. 15 – A p eri st alt ic pu mp an d a gra die nt mix er e.g . pu mp P- 1, gra die nt mix er GM- 1 . – A o ne pu mp sy ste m, e.g . ÄK T A pr ime ™ plus. – A t wo pu mp sy st em, e. g FPLC or ÄK TA. 1. Choose s tarting conditions as outlined under Optimizing star ting conditions.
p. 16 Fig 4. Bind in g cap aci ty of hu man I gG , HSA an d hum an t ran sfe rr in at d if fe rent p H´s on Hi Trap Q HP , 1 m l. 4. Ap pl y the s amp le s olu tio n to th e col umn w it h a pum p or a syr in ge, at a f low r ate e qua l to th e fl ow ra te to b e use d in t he pu rif i cat ion m et hod .
p. 1 7 7. Scaling up For q uic k scal e- up of pu ri f icat io ns ( bac k pre ssu re wil l inc rea se ), t wo o r th ree Hi T rap i on ex chan ge co lum ns of t he sa me ty pe ca n be co nne ct ed in s er ies .
p. 18 Rel ate d pro duc t s No. S upp lie d Co de No . Hi T rap I EX Se le ct ion K it 7 x 1 ml 17 - 60 02- 33 Hi T rap D es alt in g 5 x 5 ml 17 - 1408 -01 Hi T rap D es alt in g 100 x 5 m l* 11-0 00.
p. 19 Realated literature Ion Exchange Chr omatography & Chromatofocusing Handbook, Principles and Methods 1 11 - 0004-21 Io n Exc han ge Co lu mns a nd Me di a, Sel ec ti on Gu ide 1 18 - 1127 -3.
HiTrap, Sepharose, Sephadex, FPLC, ÄKT A , ÄKT Aprime, ÄKTAdesign, Dr op Design, NICK, NAP , HiPrep and HiLoad are trademarks of GE Healthcare companies.
デバイスGE SP HPの購入後に（又は購入する前であっても）重要なポイントは、説明書をよく読むことです。その単純な理由はいくつかあります：
GE SP HPをまだ購入していないなら、この製品の基本情報を理解する良い機会です。まずは上にある説明書の最初のページをご覧ください。そこにはGE SP HPの技術情報の概要が記載されているはずです。デバイスがあなたのニーズを満たすかどうかは、ここで確認しましょう。GE SP HPの取扱説明書の次のページをよく読むことにより、製品の全機能やその取り扱いに関する情報を知ることができます。GE SP HPで得られた情報は、きっとあなたの購入の決断を手助けしてくれることでしょう。
GE SP HPを既にお持ちだが、まだ読んでいない場合は、上記の理由によりそれを行うべきです。そうすることにより機能を適切に使用しているか、又はGE SP HPの不適切な取り扱いによりその寿命を短くする危険を犯していないかどうかを知ることができます。
ですが、ユーザガイドが果たす重要な役割の一つは、GE SP HPに関する問題の解決を支援することです。そこにはほとんどの場合、トラブルシューティング、すなわちGE SP HPデバイスで最もよく起こりうる故障・不良とそれらの対処法についてのアドバイスを見つけることができるはずです。たとえ問題を解決できなかった場合でも、説明書にはカスタマー・サービスセンター又は最寄りのサービスセンターへの問い合わせ先等、次の対処法についての指示があるはずです。
